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Mycoplasma Detection Kit with UDG PCR Mix and loading Dye (MB000-1591)

Mycoplasma Detection Kit with UDG PCR Mix and loading Dye (MB000-1591)

支原體檢測試劑盒

貨號

規(guī)格

MB000-1591

48 rxn

MB000-1592

96 rxn

概述 性能 相關產品 應用 圖片 數據及文件 文獻 Q&A COA

支原體(mycoplasma):又稱霉形體,為目前發(fā)現的最小的最簡單的原核生物,估計有15%~35%的細胞被支原體污染。支原體污染會對細胞造成多方面的影響,包括代謝、免疫或生化特性、生長狀況、以及細胞存活等多方面的改變,影響實驗結果的穩(wěn)定性、可靠性和準確性;支原體難以檢測,同時也很難消除,其能輕易地通過0.22μm標準濾膜,同時也能拮抗絕大多數的抗生素,給細胞培養(yǎng)造成巨大損失。因此細胞都需要定期(如每2~3個月)進行支原體污染的檢測。許多方法可用于檢測支原體,包括肉湯或瓊脂培養(yǎng),直接或間接的熒光染色、ELISA、直接或間接的PCR法等,其中,直接PCR法靈敏度高。

為保證PCR結果的準確性,要預防非特異性PCR擴增和污染,常用的措施是采用熱啟動Taq酶和UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)。

化學修飾Taq酶活性中心被封閉,使得該酶在低溫或常溫沒有活性,因此在加樣至PCR擴增前,不會產生由于引物錯誤配對而形成的非特異性擴增。高溫(如95℃)條件下,化學修飾基團會水解脫落,釋放全部酶活性,從而實現Taq酶的熱啟動。最大程度降低非特異擴增和引物二聚體的形成,提高擴增靈敏度和特異性。

UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能選擇性水解斷裂含有dU的單鏈或雙鏈 DNA中的尿嘧啶糖苷鍵,形成有缺失堿基的DNA鏈,在堿性條件及高溫下會進一步水解斷裂,從而被消除。本產品選擇UDG酶,最佳活性溫度為50℃,95℃滅活。

本產品含有化學修飾熱啟動酶的2×PCR mix,配以dUTP和UDG酶,可最大程度降低非特異擴增和引物二聚體的形成,有效防止PCR產物的交叉污染。同時在PCR管中預先加入上樣Loading Dye成份,使PCR前加樣處理及后續(xù)電泳上樣變的更方便,以達到準確檢測支原體污染,重復性好,可信度高。