ResiQuant®支原體檢測試劑盒（熒光探針qPCR法）與ResiQuant®支原體DNA提取純化試劑盒（磁珠法）（CAT. CRB00-0031/CRB00-0032）配套使用，定性檢測主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批以及細胞制品中是否有支原體的污染。 本試劑盒采用熒光探針qPCR技術(shù)，在支原體保守基因片段設(shè)計引物探針，依據(jù)序列比對結(jié)果可定性檢測約174種支原體。檢測特異性強，與支原體親緣關(guān)系較近的細菌（乳酸桿菌、梭菌、鏈球菌等）和常見工程細胞如CHO、VERO、HEK293等無檢出；根據(jù)EP 2.6.7、JP XVIII和USP <77>支原體檢測相關(guān)要求進行驗證，檢測限可達10 CFU/mL，符合EP 2.6.7對于NAT方法替代培養(yǎng)法的檢測靈敏性要求。 本試劑盒引入尿嘧啶-N-糖基化酶（uracil-N-glycosylase，UNG）防污染系統(tǒng)，可有效去除PCR產(chǎn)物的殘留污染，避免由擴增產(chǎn)物污染而導(dǎo)致的假陽性。本試劑盒采用FAM+HEX/VIC雙通道檢測方法，且包含PC（陽性對照）和RC（回收控制），用于監(jiān)測檢測靈敏度及樣本回收情況，避免假陰性。試劑組分中含有參比染料ROX，適用于ABI熒光定量PCR儀或其他同類設(shè)備，起到熒光參比光程校正的作用。 首次使用建議先進行樣本適用性研究，包括基質(zhì)干擾、檢測限及專屬性。低水平污染樣本（≤10 CFU/mL）中支原體核酸含量不符合正態(tài)分布，本試劑盒采用3復(fù)孔報告方式，置信度在90%以上。 產(chǎn)品特點 1.靈敏度高：檢測限10CFU/mL；和培養(yǎng)法平行比對驗證，靈敏度等效或優(yōu)于培養(yǎng)法 2.覆蓋范圍廣：可檢測約174種支原體 3.假陽性控制：采用touch down 的qPCR技術(shù)，減少非特異性擴增降低背景干，引入UNG防污染系統(tǒng)，降低擴增產(chǎn)物導(dǎo)致的污染；有效避免假陽性 4.假陰性控制：采用雙通道檢測方法，包含PC（陽性對照）和RC（回收控制），監(jiān)控樣本回收和基質(zhì)干擾情況，避免假陰性 5.產(chǎn)品合規(guī)：按照歐洲藥典EP 2.6.7和日本藥典JP G3驗證，符合法規(guī)要求
驗證項目 合格標準 結(jié)果 檢測限 10 CFU/mL支原體加標CHO細胞樣本24次檢測中陽性數(shù)量≥23次 合格 專屬性 9種病原菌+4種細胞基因組DNA檢測無檢出 合格 檢測范圍 柔膜菌綱物種 174種 凍融穩(wěn)定性 檢測試劑盒15次凍融10 CFU/mL支原體加標樣本可檢出 合格 儀器適用性 ABI7500/伯樂CFX96儀器對 10 CFU/mL支原體加標樣本可檢出 合格 干擾性 CHO/293細胞/T細胞樣本（5×106）; 細胞培養(yǎng)上清；血清樣本；血清培養(yǎng)基 樣本；細胞凍存液10 CFU/mL支原體加標樣本可檢出 合格 藥典培養(yǎng)法平行驗證 與藥典培養(yǎng)法檢測水平相當(dāng) 合格
