“穿戴好手部和面部的防護(hù)用品,我們打開液氮罐,液氮?dú)饣纬傻陌嘴F從罐體開口往下緩緩流淌。向罐體中看去,似乎能感受到接觸空氣的液氮液面正在巨大的溫差下沸騰。無數(shù)細(xì)胞就像生命的種子,在目光觸及不到的低溫液體內(nèi)沉睡。我們盡可能迅速的取出早已被標(biāo)記好的細(xì)胞凍存管。迅速水浴解凍后經(jīng)過一系列操作,細(xì)胞就完成了從休眠狀態(tài)到活躍狀態(tài)的轉(zhuǎn)換,此后我們只能祈禱蘇醒后的細(xì)胞們能盡快恢復(fù)正常的生命活動?!?
對于大部分有細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)歷的小伙伴來說,閉上眼睛就能回憶起完整的細(xì)胞凍存和復(fù)蘇全流程。可能細(xì)胞凍存階段給我們的印象主要是-80℃冰箱和液氮罐,而直接陪伴細(xì)胞進(jìn)入低溫冷凍“夢鄉(xiāng)”的凍存液則往往存在感不高。那這類常得不到重視的細(xì)胞凍存液試劑,究竟其作用是什么?
細(xì)胞凍存液的門道
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)老手們都了解,細(xì)胞冷凍講究一個(gè)“慢凍速融”。傳統(tǒng)的操作流程是將細(xì)胞用凍存液重懸后分裝到凍存管內(nèi),然后再緩慢的降溫到-80℃,而后轉(zhuǎn)入液氮罐長期保存。其中凍存液的主要功能就是防止冷凍過程中形成會損傷細(xì)胞的冰晶,同時(shí)在長期冷凍和解凍過程中為細(xì)胞提供支持成分。市面上有眾多商品化的細(xì)胞凍存液產(chǎn)品,而也有人在堅(jiān)持使用自行配制的凍存液。細(xì)胞凍存液真的會對細(xì)胞的保存和復(fù)蘇產(chǎn)生重要影響嗎?事實(shí)上,使用不同的凍存液保存細(xì)胞,其結(jié)果可能大不相同。
“原始”的細(xì)胞凍存液提示了哪些信息?
如果需要凍存的細(xì)胞屬于常用的細(xì)胞系,很多實(shí)驗(yàn)室會選擇自行配制凍存液來使用。典型的配方是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO(二甲基亞砜)和5%到40%的血清。甚至有90%血清+10%DMSO的配方。DMSO是一種滲透性保護(hù)劑,能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn),減少冰晶的形成,防止冷凍過程對細(xì)胞造成不可逆的機(jī)械性損傷。血清中的白蛋白是一種關(guān)鍵的組分,可在細(xì)胞周圍形成保護(hù)層。當(dāng)細(xì)胞開始解凍時(shí),血清也可以與釋放的毒素相結(jié)合。當(dāng)在營養(yǎng)豐富的環(huán)境中被凍存,細(xì)胞也往往更容易在解凍后恢復(fù)狀態(tài)。除了DMSO和血清,凍存液中通常含有的基礎(chǔ)培養(yǎng)基也有維持滲透壓、補(bǔ)充血清中含量不足的某些營養(yǎng)成分等作用。
這些成分的組合使自配的凍液具備了保護(hù)細(xì)胞免受冰晶損傷、營養(yǎng)支持和化學(xué)性保護(hù)等基本功能,使得細(xì)胞長期冷凍保存成為可能。但是,細(xì)心的你會發(fā)現(xiàn):自行配制的凍存液用于凍存某些敏感的細(xì)胞(如干細(xì)胞等)后很難正常復(fù)蘇,甚至部分生命力旺盛的細(xì)胞系在復(fù)蘇后也會出現(xiàn)形態(tài)和增殖速度方面的問題。這會和凍存液有關(guān)嗎?
自配的凍存液有哪些潛在風(fēng)險(xiǎn)?
自配的培養(yǎng)液幾乎都會含有血清和DMSO這兩種物質(zhì)。血清,我們知道它實(shí)際上是一種來自動物體內(nèi)的天然復(fù)合物,其批次間差異不可能完全避免。解凍后細(xì)胞的活力可能因凍存液中血清批次的不同而有差異。相比于永生化的細(xì)胞系,原代細(xì)胞更敏感從而更容易受到這方面影響。對于多能干細(xì)胞(PSC),血清中的某些成分可能導(dǎo)致它們分化,并且不是朝著你期望的方向。DMSO雖然在一定條件下能保護(hù)細(xì)胞,但它本身是有毒的,同時(shí)DMSO也會改變生物膜對電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。一些脆弱的細(xì)胞也會因?yàn)镈MSO的存在更難以在復(fù)蘇后恢復(fù)狀態(tài)。雖然自配的凍存液相對廉價(jià),但因?yàn)殚L期實(shí)驗(yàn)的可靠性需求,以及凍存中的細(xì)胞庫的寶貴性,越來越多的細(xì)胞培養(yǎng)人員會更傾向于使用可靠的商品化細(xì)胞凍存液。
有沒有可靠的商品化凍存液選擇?
為了幫助更多用戶解決細(xì)胞凍存過程中的麻煩,依科賽推出了一系列化學(xué)成分明確、經(jīng)過嚴(yán)密的性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的即用型細(xì)胞凍存液產(chǎn)品。OptiVitro 無蛋白,CD細(xì)胞凍存液
Cat#UC000-N011、UC000-N021
適用于:多種哺乳動物細(xì)胞低溫冷凍保存的即用型凍存液,無外源污染風(fēng)險(xiǎn)。
二、經(jīng)典款
OptiVitro 無血清細(xì)胞凍存液Cat#VUC00-N011
適用于:多種哺乳動物細(xì)胞低溫冷凍保存的即用型凍存液,普適性更強(qiáng)。
三、無DMSO款
OptiVitro 無DMSO細(xì)胞凍存液Cat#UC000-N031
適用于:包括多種干細(xì)胞在內(nèi)的貼壁細(xì)胞凍存的即用型細(xì)胞凍存液。
產(chǎn)品信息